酶底物法检测试剂

1.工作原理：

加入含有总大肠菌群细菌的水样，目标细菌在Minimal Medium ONPG-MUG培养基中36℃培养，总大肠菌群细菌产生的特异性生物酶-半乳糖苷酶能分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的色源底物ONPG，使培养基呈现黄色;同时水样中大肠埃希氏菌产生特异性的β-葡萄糖醛酸酶分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的荧光底物MUG，产生特征性荧光。同样原理，耐热大肠菌群(粪大肠菌群)在44.5℃培养时会分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的色源底物ONPG，使培养基呈现黄色。

2.操作方法

100ML水样中加入酶底物法试剂拧紧盖子摇匀至完全溶解。 将定量瓶100ML水样全部倒入定量盘中。 将51孔或者97孔定量盘用程控封口机定量封口。 选择培养所需温度放入恒温培养箱培养24小时。 对照阳性比色盘数出大小孔的阳性数量并做好记录。 参照标准MPN表，分别查出97孔或者51孔的具体数值。

3.定性测试：

(1)在100ml水样中加入试剂，溶解，36℃±1℃培养24h;

(2)结果判读

无色=阴性

黄色=总大肠菌群阳性

黄色+荧光=大肠埃希氏菌群阳性

注:耐热大肠群菌(粪大肠菌群)需44.5℃培养24h后，观察黄色为阳性

4.定量检测

(1)在100ml水样中加入试剂，溶解;

(2)倒入51孔定量检测盘(定量孔板)或97孔定量检测盘(定量孔板)中;

(3)用程控定量封口机对定量检测盘(定量孔板)进行封膜，36℃±1℃培养24h;

(4)定量检测盘(定量孔板)结果判读:

无色=阴性

黄色格子=总大肠菌群阳性

黄色+荧光格子=大肠埃希氏菌群阳性

查对照MPN表计数

注:耐热大肠群菌(粪大肠菌群)需44.5℃培养24h后，观察黄色格子为阳性结果，查对照MPN表计数。

水质大肠菌群酶底物法检测系统：

由程控定量封口机、51或97孔检测板、100mL定量瓶、酶底物检测试剂四部分组成。检测水样范围:饮用水、源水、瓶装水、中水、二次供水、管网水、废水、食品水、畜牧用水、医疗用水等。

该检测方法采用大肠杆菌产生β-半乳糖苷酶分解色源底物-ONPG(Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside) 使培养液呈黄色。大肠埃希氏菌产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG（4 - methyl-umbelliferyl-β-glucuronide）使培养液在波长366 nm 紫外光下产生荧光的原理,来定性定量水中总大肠菌群、粪大肠菌群（耐热大肠菌群）及大肠埃希氏菌。

该检测方法是国际上发达国家普遍采用的检测方法,相比我国标准的检测方法,如多管发酵及滤膜法具简便快捷，其选择性培养基具有抑制杂菌的作用，假阳性低，定量准确。由于该方法的方便快速，在实验室日常检测中能提高效率，缩短检测时间，在应急监测中能及时报出数据，避免造成大的公共安全事故。

国产酶底物法检测试剂完全符合《生活饮用水标准检验方法》的培养基，采用固定底物技术酶底物法。200个/盒。能够精确检出100ml水样中单个的活性总大肠菌群和大肠埃希氏菌，以及粪大肠菌群，假阴性率低。每个单位试剂可抑制200万个异养细菌，假阳性率低。能够消除传统方法中的主观判断影响，准确性高于滤膜法及多管发酵法。